转化pET32a一个菌落也不长是什么原因啊我在做分子克隆,克隆了四个片段,要在pET32a载体上表达,可是酶切,连接,转化大肠杆菌BL21以后一个菌落也不长,我已经试过各种载体和目的片段的比例,而

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/04/28 08:02:24

转化pET32a一个菌落也不长是什么原因啊我在做分子克隆,克隆了四个片段,要在pET32a载体上表达,可是酶切,连接,转化大肠杆菌BL21以后一个菌落也不长,我已经试过各种载体和目的片段的比例,而
转化pET32a一个菌落也不长是什么原因啊
我在做分子克隆,克隆了四个片段,要在pET32a载体上表达,可是酶切,连接,转化大肠杆菌BL21以后一个菌落也不长,我已经试过各种载体和目的片段的比例,而且我没有没酶切的pET32a载体转化的效果很好,连接酶也没有问题,还有可能是什么原因呢?
PCR 扩增的目的片段,还有没切之后的纯化都是用的胶回收的办法纯化的,纯化后我也鉴定过,DNA的量都很大.切胶时用的刀片也没有生锈.

转化pET32a一个菌落也不长是什么原因啊我在做分子克隆,克隆了四个片段,要在pET32a载体上表达,可是酶切,连接,转化大肠杆菌BL21以后一个菌落也不长,我已经试过各种载体和目的片段的比例,而
你每一步都要做阳性对照啊,否则你说没有问题怎么可信呢,说不定是你操作的问题呢,酶切时候的阳性对照做了没有,连接的阳性对照做了没有,还有你片段多大,是否毒性蛋白,都有影响的.

连接环节很重要,你可以试试不同的连接酶,还要注意载体和目的片段的摩尔比,

感受态自己做的？

一般转化过程不会出问题，失败的原因应该出现在连接环节，你看一下你做连接实验时连接的时间有没有问题，这是决定外源基因转化效率的关键步骤，具体的可以问你的指导老师。

转化pET32a一个菌落也不长是什么原因啊我在做分子克隆,克隆了四个片段,要在pET32a载体上表达,可是酶切,连接,转化大肠杆菌BL21以后一个菌落也不长,我已经试过各种载体和目的片段的比例,而菌落PCR有带,可提取的质粒没带!请问我转化的单菌落做菌落PCR有带,单相对应的菌落提取质粒P不出带是什么原因呀?引物是特异性的! 做食品菌落总数一个菌都不生长是什么原因?连做两次都是没有一个菌生长. 转化完长菌落的平板可以4度保存吗?能存多久? 水的菌落总数超标是什么原因稀释平板测数菌落很多是什么原因为什么基因链接好做完转化之后长出来的菌落做PCR验证没有结果呢,扩增不出来? 转化大肠杆菌平板出现卫星菌落是怎么回事糕点检验中菌落总数实验的空白对照中有菌落生长是什么原因? 划线培养细菌后没有单个的菌落是什么原因细菌一个菌落多少细菌做菌落检验的时候,1:10平皿没有菌落,1:100平皿却出现菌落是什么原因?而且菌落大多实在平皿表面边缘处放线菌的菌落类似于( )菌落.酵母菌菌落类似于（）菌落.第一个填霉菌,第二个填细菌对吗? 为什么菌落只长在培养基表面? 一个细菌就是一个菌落吗? 一个细菌又称一个菌落对吗菌落总数实验中,同罐产品瓶子不一样,有的平皿出现花一样的菌落,有的没有是什么原因? 纯净水菌落总数超标是什么原因呢?为什么用同一个管道只是桶装水菌落总数超标,瓶装水没事呢?