我想问一个问题,我将一个目的基因连接到质粒上 我想将这个质粒连同目的基因,一块扩增很多个用什么方法.

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/08 11:18:18
我想问一个问题,我将一个目的基因连接到质粒上 我想将这个质粒连同目的基因,一块扩增很多个用什么方法.

我想问一个问题,我将一个目的基因连接到质粒上 我想将这个质粒连同目的基因,一块扩增很多个用什么方法.
我想问一个问题,我将一个目的基因连接到质粒上 我想将这个质粒连同目的基因,一块扩增很多个
用什么方法.

我想问一个问题,我将一个目的基因连接到质粒上 我想将这个质粒连同目的基因,一块扩增很多个用什么方法.
双酶切,然后做ligase连接就好.连接的过程中会出现很多突变.

然后你把连接的产物做转化.如果有条件可以使用电激转化,这个转化的效率非常点(连接产物本来就不多,突变又多).如果条件不够就用热激转化,热激转化的效率低一些,不如电激转化好.千万不要用TSS转化(效率太低了,只能用成型的质粒).

转化之后你要挑选菌落,去做测序(一般交给公司),因为突变很多,一定要测序到完全正确的序列.如果没有测到,就继续挑选菌落.如果菌落挑完了,就重新转化.这段时间要多扶老太太过马路哦.

等到你得到了好的菌落,就可以培养它,提取质粒.这个量就很大了.

给你个简单的protocol
PCR 你的基因
对PCR产物,和空质粒,同时使用双酶切(分开的),加入合适的NEBuffer
使用T4ligase 和Buffer 常温1小时或者16度过夜 连接.
热激转化(电激转化还有clean脱盐)
挑去菌落
提取DNA 测序(((得到了你要的哦)))
选定菌落,液氮保存

我想问一个问题,我将一个目的基因连接到质粒上 我想将这个质粒连同目的基因,一块扩增很多个用什么方法. 基因工程将目的基因拼接到载体上的一个问题~既然剪切目的基因和载体上限制酶切点的是同一种限制酶,那么从载体上剪下的片断应该与目的基因一样啊~那这样将目的基因再拼接到载体上又 双基因 载体 连接需要将两个不同的基因同时连接到一个载体上,一般而言,是先将其中一个基因和载体相连,再将另一个载体和其相连,我想知道的是能不能同时连接呢,需要注意什么问题呢?说 大家好,问一个不能等到台面上的问题:目的基因片段是扩增片段吗?什么是RT-PCR的目的基因片段,谢谢 您好,请问lac启动子可以再假单胞菌中启动连接上的目的基因的表达么?希望您能够帮我分析解答!谢谢!我很坦诚的告诉您,我之所以问这个问题,是因为我想将一个目的基因转入丁香假单胞菌中, 关于 克隆的问题.假如我有有一个基因片段,未知序列.我可以把它连接到T载体,然后PCRPCR 用T载体PRIMER,然后测序,然后酶切出片段---------》从而达到得到很多此片段的目的.这个做法行么?或者别 高人 您好核酸探针的碱基序列能与目的基因互补形成标记基因我想问的是核酸探针是一段单链核苷酸片段上面的碱基排列顺序和目的基因是对应的才能互补吗 还有一个问题再设计核酸探针 我想问你们一个问题 有谁了解基因污染?为什么把目的基因连接到叶绿体中就可以避免基因污染?不甚感激 关于载体构建的问题我要构建一个GFP表达载体标记人体骨髓间充质干细胞的黏着斑,我想问一下这个载体的目的基因怎么获得?质粒载体用哪种比较好? 怎样克隆一个目的基因? 我想问一个关于基因工程的问题,如抗病虫基因的质粒DNA导入植物体,可是植物是真核生物, 对了还有一个问题需要问一下关于将一个纯电容和一个纯电感串联后连接到300伏特50赫兹的正弦交流电源上, 目的基因怎么表达当目的基因接到受体细胞中的DNA中不一定可以表达,那么怎么让其表达呢?我还有一个问题就是什么是编程区与非编程区.打错字了,不是编程是编码 我想再问最后一个问题 目的基因未连接到克隆载体上这是为什么?我用的克隆载体是PMD-18! 请问,把一个1.5伏的干电池正向连接到二极管的两端,会出现什么问题? 我想将 一个目的基因 植入质粒里面 能不能用将目的基因克隆进质粒里面这样讲呢