本人看了很多论坛和资料,大多的elisa都是测未知抗原和抗体,因为我是从植物内混合蛋白质中测出目的蛋白的浓度,我们目前有需检测蛋白的相关抗原、自己免疫的多克隆的一抗和HRP-标记的二

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/04/29 09:09:55

本人看了很多论坛和资料,大多的elisa都是测未知抗原和抗体,因为我是从植物内混合蛋白质中测出目的蛋白的浓度,我们目前有需检测蛋白的相关抗原、自己免疫的多克隆的一抗和HRP-标记的二
本人看了很多论坛和资料,大多的elisa都是测未知抗原和抗体,因为我是从植物内混合蛋白质中测出目的蛋白的浓度,我们目前有需检测蛋白的相关抗原、自己免疫的多克隆的一抗和HRP-标记的二抗,是不是我们包被的时候用包被液倍比稀释抗原,并将需检测的蛋白也按照设定的1:20、1:40、1:80、1:160稀释后一起包被过夜?
我在想我是不是可以认定我们有的这个抗原则为我们的标准品,然后来检测我们的蛋白.不甚感激~
我们目前的设计流程是：
1.包被抗原和待测蛋白 4℃过夜
（抗原按照倍比稀释加入包被液为:10,5,2.5,1.25,0.625,0.3125,0.15625,0 单位是μg/ml 蛋白1:100稀释都加入)
2.第二天弃液,PBST洗板3次,拍干
3.每孔加入3％BSA封闭至满孔,37℃湿盒湿育 2h
4.洗版,
5.每孔加入稀释好的一抗（1:80）100μl,37℃湿盒湿育 2h
6.洗版,
7.每孔加入辣根酶标记的IgG(1:1000)100ul,37℃湿盒湿育 1h
8.
9.每孔加入100ul底物反应液（现用现配）暗反应15min
10.加入50μl 2MH2SO4 停止反应上机在450nm下测标曲并读值.
目前的问题是：如何能确定我们蛋白的最佳稀释浓度,和一二抗的最佳工作浓度?

本人看了很多论坛和资料,大多的elisa都是测未知抗原和抗体,因为我是从植物内混合蛋白质中测出目的蛋白的浓度,我们目前有需检测蛋白的相关抗原、自己免疫的多克隆的一抗和HRP-标记的二
具体做法要看你的实验设计,是要做夹心ELISA还是间接ELISA. 看你的描述应该是夹心法: 包被单抗到孔板上,然后加抗原标准品和未知样品孵育, 然后加HRP标记的二抗,最后TMB显色.
所以你第一步应该是包被液稀释你的一抗,过夜包被,第二天BSA做封闭, 然后测样品.
建议楼主动手前先了解一下基本的ELISA技术知识.
请用google搜索引号内的内容: "Technical Guide for ELISA filetype:pdf"
补充: 你这种方式是直接ELISA,也是最不靠谱的一种方法. 如果你们坚持这样做的话...
1. 标准品和样品的最佳稀释度,这个得做实地测试,看看待测蛋白的信号是个什么水平,再做调整
2. 一二抗的稀释度, 你需要做一个滴定, 比如,给定一定量的标准品,测试1:1000 到1:10000 的一抗和二抗组合,看看那个组合信号高, 同时背景低.

本人看了很多论坛和资料,大多的elisa都是测未知抗原和抗体,因为我是从植物内混合蛋白质中测出目的蛋白的浓度,我们目前有需检测蛋白的相关抗原、自己免疫的多克隆的一抗和HRP-标记的二这句用英语怎么说地道?通过英文论坛和书籍解决了我很多技术上的问题. 英语和英语口语要怎么学,才能在一年内的时间里可以与外国人轻松对话?注重方法,本人努力型!看了很多关于学英语的资料,感觉都像是浮空一样.本人英语水平一般,六级水平,但是刚刚过,听力 16.国家旅游局在第三届海峡论坛大会上宣布,大陆居民个人赴台旅游正式启动,小丽成为了一名幸运者,她查询了很多关于台湾的资料,你认为不可信的是（）A.台湾环岛建有电气化铁路和高速公 QC手法中管制图与直方图具体的相同点和不同点是什么,两者分别达到什么样的目的主要是问个实战的高手来,我本人也看了很多资料,也算是明白了其中的一些,但不是太清晰,高手过来以绝对答想买一本GMAT OG13的综合,我看还有数学、语文的单册什么的,还用买么?GMAT还有什么其他的必备资料,看了些论坛推荐的资料,太多了.怎么选择啊?现在还出了一本Quantitative的分册,不过没有引进版清风梦影注册失败原因有人在清风梦影论坛注册号了么?我注册了很多次都不行……谁要是有号给我一个.可以共享,我只为了看贴子,不留言,当然如果完全给我也好.愿意给的把ID和密码发给我读地藏经的反应?我看了不少关于那里的论坛,很不可思议,我去寺庙请了很多经书,我一直想学佛,一直找不到方法,希望能得到唐朝冬至是怎么过的?在洛卡论坛看了很多关于饺子的做法也知道了冬至的来历,不过谁知道在唐朝是怎么过冬至的呢? exo日本下跪是什么情况日本和中国这关系真的很上火我看很多人都脱饭了本人也在考虑但还是想知道究竟是怎么回事 ELISA和PCR的原理和用途不想和同学分享我找来的资料,该怎么回绝?为了学习,家长帮我买了很多学习资料,我自己也下功夫找了一些,我在学校里看的时候被某个同学看到,他叫我借他复印一下,我不太愿意,因为很多是什么是行政违法和民事违法?我是初中生,学习政治里面行政违法和民事违法,我查了很多资料都不明白!语言最好是初中生看的明白!最好有几个典型的简短的案例说一下! ELISA技术和WESTERN的不同是什么 elisa的原理和实验步骤新手,看到论坛里面很多说美私美卡的,不懂求告知什么溶剂才可以进气相?看了很多资料,有说常见能进气相的溶剂最好是不溶于水的,弱极性的比如正己烷、石油醚.但也有说乙酸乙酯、二氯甲烷、四氯甲烷可以进气相.然后本人就晕了.恳请各电磁场的远场和近场的划分标准是怎样的.看了很多资料,有的说1个波长以内是近场,有的说是3个波长.