细胞培养的实验报告要找实验目的,实验材料和器材,实验流程,实验结果.

细胞培养的实验报告要找实验目的,实验材料和器材,实验流程,实验结果.
细胞培养的实验报告
要找实验目的,实验材料和器材,实验流程,实验结果.

细胞培养的实验报告要找实验目的,实验材料和器材,实验流程,实验结果.
实验：细胞培养
　　1.实验目的
　　初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程,为生物工程在医学上的应用打下基础.
　　2.实验原理
　　从生物体中取出某种组织或细胞,模拟体内生理条件,在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代,这一过程称为细胞培养.细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞,并在有控制的环境条件下进行实验,避免了体内实验时的许多复杂因素,还可以与体内实验互为补充,可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象,耗费少,比较经济,因此成为生物学研究的重要手段.近年来,在体细胞遗传、分化、胚胎发生、肿瘤发生、免疫学、细胞工程、放射生物学以及老年学等一系列的研究领域中得到广泛的应用,并取得了丰硕的成果.
　　细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养.直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养,即将培养的细胞分散后,从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养,传代培养的累积次数就是细胞的代数.
　　细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作.所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、pH值、无机盐影响,消毒、配液等均有严格的规范和要求,特别是无菌操作是细胞培养成败的关键.
　　3.实验用品
　　3.1 材料和标本 乳兔、HeLa细胞(人宫颈癌细胞)
　　3.2 器材和仪器 手术器械、平皿、培养瓶、吸管、离心管(灭菌后备用)、酒精灯、烧杯、超净工作台、二氧化碳培养箱、倒置显微镜.
　　2.3 试剂 含有5％小牛血清的MEM培养液、0.01mol／L PBS,0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA混合消化液、75％乙醇.
　　4.实验方法
　　4.1 原代细胞培养
　　4.1.1 原理
　　细胞培养(Cell culture)是模拟机体内生理条件,将细胞从机体中取出,在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代,进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究.近年来,广泛地应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域,发展成一种重要生物技术,并取得显著成就.由体内直接取出组织或细胞进行培养叫原代培养.原代培养细胞离体时间短,性状与体内相似,适用于研究.一般说来,幼稚状态的组织和细胞,如：动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养.
　　4.1.2 操作
　　①．取材
　　用颈椎脱位法使乳兔迅速死亡.然后,把整个动物浸入盛有75％乙醇的烧杯中数秒钟消毒,取出后放在大平皿中携入超净台.用消过毒的剪刀剪开用碘酒和乙醇再次消毒后的皮肤,剖腹取出肝脏或肾脏.置于无菌平皿中.
　　②．切割
　　用灭菌的PBS液将取出的脏器清洗三次,然后用眼科手术剪刀仔细将组织反复剪碎,直到成1mm3左右的小块,再用PBS清洗,洗到组织块发白为止.移入无菌离心管中,静置数分钟,使组织块自然沉淀到管底,弃去上清.
　　③．消化、接种培养
　　吸取0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA混合消化液1ml,加入离心管中,与组织块混匀后,加上管口塞子,37℃水浴中消化8～10分钟,每隔几分钟摇动一下试管,使组织与消化液充分接触,静止,吸去上清,向离心管中加入5～10ml含5％小牛血清的MEM培养基,用吸管吹打混匀,移入二个培养瓶中,置于二氧化碳培养箱中培养.
　　4.1.3 结果
　　细胞接种后一般几小时内就能贴壁,并开始生长,如接种的细胞密度适宜,5天到一周即可形成单层.
　　4.2 传代细胞培养
　　4.2.1 原理
　　体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代,以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞,并维持细胞种的延续.培养的细胞形成单层汇合以后,由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭,将培养的细胞分散,从容器中取出,以1:2或l:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养,即为传代培养.
　　细胞“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间,与细胞世代或倍增不同.在一代中,细胞培增3～6次.细胞传代后,一般经过三个阶段：游离期、指数增生期和停止期.
　　常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度,即细胞群的分裂相数／100个细胞.一般细胞分裂指数介于0.2％～0.5％,肿瘤细胞可达3～5％.细胞接种2～3天分裂增殖旺盛,是活力最好时期,称指数增生期(对数生长期),适宜进行各种试验.
　　4.2.2 操作
　　①．将长成单层的原代培养细胞或HeLa细胞从二氧化碳培养箱中取出,在超净工作台中倒掉瓶内的培养液,加入少许消化液.(以液面盖住细胞为宜),静置5～10分钟.
　　②.在倒置镜下观察被消化的细胞,如果细胞变园,相互之间不再连接成片,这时应立即
　　在超净台中将消化液倒掉,加入3～5ml新鲜培养液,吹打,制成细胞悬液.
　　③．将细胞悬液吸出2ml左右,加到另一个培养瓶中并向每个瓶中分别加3ml左右培养液,盖好瓶塞,送回二氧化碳培养箱中,继续进行培养.
　　4.2.3 结果
　　一般情况,传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上,2～4天就可在瓶内形成单层,需要再次进行传代.
　　4.3 器材及液体的准备和无菌操作的注意事项
　　4.3.1 器材和液体的准备
　　细胞培养用的玻璃器材,如：培养瓶、吸管等在清洗干净以后,装在铝盒和铁筒中,120℃,2小时干烤灭菌后备用；手术器材、瓶塞、配制好的PBS液用灭菌锅15磅,20分钟蒸气灭菌；MEM培养液、小牛血清、消化液用G6滤器负压抽滤后备用.
　　4.3.2 无菌操作中的注意事项
　　在无菌操作中,一定要保持工作区的无菌清洁.为此,在操作前要认真地洗手并用75％乙醇消毒.操作前20～30分钟起动超净台吹风.操作时,严禁说话,严禁用手直接拿无菌的物品,如瓶塞等,而要用器械,如止血钳、镊子等去拿.培养瓶要在超净台内才能打开瓶塞,打开之前用乙醇将瓶口消毒,打开后和加塞前瓶口都要在酒精灯上烧一下,打开瓶口后的操作全部都要在超净台内完成.操作完毕后,加上瓶塞,才能拿到超净台外.使用的吸管在从消毒的铁筒中取出后要手拿末端,将尖端在火上烧一下,戴上胶皮乳头,然后再去吸取液体.总之,在整个无菌操作过程中都应该在酒精灯的周围进行.
　　5．实验报告
　　(1).原代细胞和传代细胞培养有哪些区别?
　　(2).总结一下你自己的经验,怎样才能既迅速,又保证无菌操作.