为什么每次做转化后菌落PCR有带,但是提质粒后就P不出.

为什么每次做转化后菌落PCR有带,但是提质粒后就P不出. 菌落PCR有带,可提取的质粒没带!请问我转化的单菌落做菌落PCR有带,单相对应的菌落提取质粒P不出带是什么原因呀?引物是特异性的! 为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急加点 kml?但是我转化后菌落长的还可以啊.酶切目的带在1000左右,质粒PCR在750左右了 菌落PCR有关问题?我们做了转化实验,将转化后的菌涂在含Kan抗性的平板上,为什么挑取能生长的菌落做PCR没有目的条带? 为什么基因链接好做完转化之后长出来的菌落做PCR验证没有结果呢,扩增不出来? 大肠杆菌转化后做菌落pcr一直p不出带是怎么回事?麻烦高手指教下pcr体系及反应时的程序,目的基因大概1000bp 最近做了连接转化,挑平板上的菌落摇菌后提质粒,单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒然后用质粒稀释100倍后进行PCR,可以看到目的条带,但是有拖带.然后我继续将质粒稀释至500倍, 转化后挑取含有目的片段的单菌落摇菌扩增以后划盘子,几天后挑取部分菌落做PCR无带,不知是何原因?划盘子后剩余的菌液提质粒测序结果与预期的片段相同，通用引物和自身引物开始都能得 在做荧光定量PCR时,PCR仪检测不到荧光信号,但是产物用琼脂糖电泳后有清晰的目的条带,请问这是为什么? 革兰氏阳性菌菌落PCR问题我最近也在做菌落PCR验证,我是直接挑单菌落进行PCR验证的,但是电泳不出现条带,胶孔里有明亮物质,100bp处有很多模糊的亮色物,我是一个新手,还望您指教一下,我这种 转化的大肠杆菌菌落周围为什么长出好多小菌落我做的大肠杆菌转化,涂平板培养了二十几个小时,有的菌落外面有些小菌落,后来平板放在4度冰箱,几乎每个菌落周围都长出了很多的小菌落,是 我的片段转入ppicza载体后转化到DH5a里,菌落PCR验证成功,为何就是提不出质粒? 关于菌落pcr我的做法是： 用枪头挑选单菌落到装有10uL水的pcr管中,然后悬浮菌液. 在做 PCR 时,吸取 2uL 做摸板,但电泳检测后,选有阳性克隆相对的菌液 8uL 与试管的液体培养基中培养.这样做, 为什么PCR突变后转化不出来呢? 双酶切连接后转化,长出了菌落,但提质粒跑电泳,分子量比目的质粒大很多,为什么 单菌落菌液PCR检测请问转化的单菌落如何用菌液PCR检测? 质粒双酶切质粒大小正确,菌落PCR,也有条带,但是双酶切就是不成功,有什么建议吗? Per2基因敲除后进行PCR鉴定,wild type条带正常,但是mutant带总是出现,连对照都有.求PCR反应条件?