作业帮菌液PCR不同条带将已扩增出来的993bp的cDNA与T载体连接,之后DH5α转化,涂平板,挑克隆!菌液PCR为何一组检测到750bp有条带,一组1000bp处有条带两种结果!1000bp条带处是我预期的条带!麻烦大师留下相
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/29 08:28:31
菌液PCR不同条带将已扩增出来的993bp的cDNA与T载体连接,之后DH5α转化,涂平板,挑克隆!菌液PCR为何一组检测到750bp有条带,一组1000bp处有条带两种结果!1000bp条带处是我预期的条带!麻烦大师留下相
菌液PCR不同条带
将已扩增出来的993bp的cDNA与T载体连接,之后DH5α转化,涂平板,挑克隆!菌液PCR为何一组检测到750bp有条带,一组1000bp处有条带两种结果!
1000bp条带处是我预期的条带!麻烦大师留下相关文献作为考证!
引物一个是19bp 一个是20bp
老师要我在论文中分析原因！
菌液PCR不同条带将已扩增出来的993bp的cDNA与T载体连接,之后DH5α转化,涂平板,挑克隆!菌液PCR为何一组检测到750bp有条带,一组1000bp处有条带两种结果!1000bp条带处是我预期的条带!麻烦大师留下相
原来扩增的时候就有两条带,回收的时候（是凝胶回收吗?）可能因为产物浓度过大,导致两条带没跑开,让你一起切下来了（回收后电泳检测了没?）,所以连接后有两种克隆.
至于说为什么会出现两种克隆,要具体问题具体分析咯.
1 可能你的模板有DNA污染,所以同时扩出了DNA的带和cDNA的带；
2 你的基因发生了选择性剪接,有多条成熟的mRNA序列；
3 该基因有一个家族,而你的两条引物分别在两个保守区；
4 引物不特异,或者扩增温度太低.
5 你的片断导入到细菌后发生重组了,这种情况在一些长得快的大肠杆菌中有发生,不过要当你完全排除上面出现的情况时,再考虑这种情况.
Most possible reason is that you have 2 PCR products at first place, one is 750 bp, another is ~1000 bp which is what you expected. Therefore, your bacterial PCR have two clones, 750 bp and 1000 bp.
You can run an agarose gel with your original PCR mix. You can find it out easily.
你的引物比较长吧，不是杂带，是引物聚合体。没事的，结果正常。这种东西哪有什么文献好引的，最底层的实验结果。