overlap引物设计要多少重叠碱基才合适在下小白一只,现在要将一个78bp、1100bp、141bp 3个片段融合起来,最大的片段1100bp在中间.片段之间的引物需要重叠碱基多少个才合适?还想请问,比方说1片段

overlap引物设计要多少重叠碱基才合适在下小白一只,现在要将一个78bp、1100bp、141bp 3个片段融合起来,最大的片段1100bp在中间.片段之间的引物需要重叠碱基多少个才合适?还想请问,比方说1片段 引物设计怎么加保护性碱基 我在做overlap PCR,两个片段一条736bp,一条255bp,20个重叠碱基,四个引物的TM值都是59度,两条都P出来了现在加入两端的引物,就是扩不出来1000的条带,这20重叠有13个是CG对,我不知道是不是退火温度的 设计引物扩增模板基因,引物中至少要有多少个碱基与模板配对?16个可以吗 谁可以简单罗列下做OVERLAP PCR的要点吗?最好图解原理 以及引物设计时候注意事项 简并引物经PCR的产物是不是都需要经过克隆?我设计的是一对简并引物,测序后有4个位点出现重叠峰,是不是简并引物的PCR产物都会出现此现象?克隆后就能确定这4个重叠峰的碱基吗?我现在已经 设计引物要先对模板DNA测序吗?不测序的话又如何知道能设计出碱基互补的引物呢?设计引物是否就是对引物长度的设计?（因为模板是已经存在的,引物只能根据模板序列设计） PCR引物设计中,引物上是否需要每个碱基都与模板链结合?为了得到想要的Tm值,或是保证长度,不产生二聚体等,可不可以有在引物上添加一些不配对的碱基?如下图：可以的话,会对扩增有影响么? 引物设计问题,以mRNA序列设计引物,然后用cDNA为模板来扩增,在设计引物时mRNA序列是否要反转序列?我想的是,不反转的话设计的引物是和mRNA互补的,而mRNA合cDNA,这样的话设计的引物就不和cDNA互 rsrii酶切位点的保护碱基是什么啊?有哪位高人知道rsrii这个酶切位点的保护碱基是什么啊?我最近要设计引物用到这个酶切位点的,可查不到它的保护碱基, PCR中引物是和谁要互补1.PCR中引物是要和哪条链互补?是我要测目的基因的链,还是其互补链?2.设计的引物可以通过序列库查到其碱基的表达,那么过去设计引物,有很多未知的序列,过去的人怎么 我设计引物改变了一个序列中的2个碱基.我要如何用PCR来验证这一改变? 设计引物的时候,酶切位点的前面的保护碱基应该怎么加,遵循什么原则. 克隆2500个碱基,该设计多长的引物呢?我准备克隆2500个碱基,引物是不是应该长一点? 带酶切位点的引物设计问题带酶切位点的引物设计时计算Tm值,退火温度及GC含量时是否要把酶切位点和保护碱基计算在内?我觉得不用,因为酶切位点可以不用跟模板结合, pcr引物设计为什么要引入酶切位点 荧光定量PCR引物中含简并引物可以吗?设计荧光定量PCR引物时,保守片段中,上游引物有一个碱基不保守,下游引物有2个碱基不保守,因此在该位置设计为简并引物,不知道这样做可不可以?另外说 我最近想设计茎环结构的引物克隆MicroRNA,但不知我发给引物公司的单链引物,在我试验时是自动形成茎环结构,还是要在引物合成后进行相关的处理才会形成茎环.此引物是做miRNA逆转录用的，