酚氯仿抽提DNA的方法及试剂配法?(蜡块组织) 初次做蜡块组织DNA提取 希望多多指教.方法具体点哦

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/04 17:38:23
酚氯仿抽提DNA的方法及试剂配法?(蜡块组织) 初次做蜡块组织DNA提取 希望多多指教.方法具体点哦

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【原 理】
将分散好的真核生物组织、细胞在含SDS和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质.破坏细胞膜、核膜,SDS可使组织蛋白与DNA分子分离,EDTA能抑制细胞中DNase的活性,使DNA分子完整地以可溶形式存在于溶液中,再用酚、氯仿/异戊醇抽提除去蛋白质,(氯仿可除去DNA溶液中微量酚的污染,异戊醇还可减少蛋白质变性操作过程中产生气泡)得到的DNA溶液经乙醇沉淀进一步纯化,为获得高纯度DNA,操作中常加入RNase除去RNA,此法可获得100~200kb的DNA片段,适用于构建真核基因组文库,Southern blot分析.
【试 剂】
1、组织细胞裂解液
100~200μg/ml 蛋白酶K
10mmol/L Tris-Cl(pH8.0)
0.1mol/L EDTA (pH8.0)
0.5% SDS
20 μg/ml RNase A
2、平衡酚(用0.5mmol/L Tris-Cl饱和,pH8.0),
3、氯仿/异戊醇(24:1v/v)
4、3mol/L乙酸钠(NaAc,pH5.2)
5、冷无水乙醇(AR)
6、70%乙醇(-20℃静置)
7、TE缓冲液(10mmol/L Tris-Cl、1mol/L EDTA (pH8.0)

酚氯仿抽提DNA的方法及试剂配法?(蜡块组织) 初次做蜡块组织DNA提取 希望多多指教.方法具体点哦 酚氯仿抽提DNA体系后出现的现象及成因,沉淀DNA时为什么要用无水乙醇 人血dna提取需要仪器要用血凝块 酚氯仿法提取DNA,都需要哪些仪器设备和试剂啊,我才开始做实验~ 用酚/氯仿法提取动物基因组DNA中,酚、氯仿、异戊醇的作用分别是什么 DNA提取的第一步,用酚氯仿抽提,呈现淡红色,这是什么原因 加入TE溶解的DNA怎么重新用酚:氯仿:异戊醇重新抽提 想问问酚氯仿法提DNA,在做PCR时,酚,氯仿,异戊醇分别会对PCR产生什么样的影响 SDS碱裂解法提取质粒DNA中加酚氯仿的作用是什么?SDS碱裂解法加完溶液3后为什么还要加酚氯仿?它的作用主要是怎样的?及它是怎样配置的? DNA凝胶电泳检测原理及方法是什么?里面的试剂和其浓度各是多少? 苯酚、氯仿、异戊醇抽提DNA的原理,以及这三者的作用是什么? 提取DNA时,用的酚氯仿异戊醇 怎么配? 降解的DNA能做PCR吗?我用酚-氯仿抽提的DNA,经凝胶电泳后发现DNA存在降解的情况,请问这样的标本做PCR的话对结果会有什么影响呢? 检验氯仿变质的最佳试剂是什么 除了浸泡法有什么简便的方法分离脱硫橡胶的溶胶和凝胶?分离采用的试剂是氯仿比较好还是甲苯较好 碱裂解法提取质粒过程中,EDTA、溶菌酶、NaOH、SDS、乙甲酸、酚/氯仿等试剂的作用是什么? SDS碱裂解法提取质粒DNA中加酚氯仿离心后为什么溶液会变三层?那三层分别是什么?及离心的作用是什么? 苯酚-氯仿法提取DNA注意事项 这几种方法提取土壤微生物DNA那种好?1.玻璃珠-PVPP-溶菌酶法2.玻璃珠-PVPP-SDS法3.玻璃珠-PVPP-冻融法4.CTAB—SDS一冻融法5.SDS-酚氯仿抽提法我现在做的课题就是从这种方法里比较哪个好……