β–半乳糖苷酶的α–互补性原理是什么

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/07 12:17:04
β–半乳糖苷酶的α–互补性原理是什么

β–半乳糖苷酶的α–互补性原理是什么
β–半乳糖苷酶的α–互补性原理是什么

β–半乳糖苷酶的α–互补性原理是什么
蓝白斑筛选的原理分类:生物科学蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法:是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等.现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息.在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS),它并不破坏读框,但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能,这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞.因此,宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性,但它们同时存在时,可形成具有酶学活性的蛋白质.这样,lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补,称为α-互补.

宿主细胞具有可编码ω-Fragment的基因,编码的ω-Fragment与载体DNA产生的LacZ α多肽相结合,才能表现出β-半乳糖苷酶活性,使菌落成蓝色。ω-Fragment和LacZ α多肽单独存在不具有酶活性。 目的基因插入到载体中后会破坏β-半乳糖苷酶活性,从而使菌落成白色,因此可利用α-互补性可进行蓝白筛选,得到连接转化成功的菌体。...

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宿主细胞具有可编码ω-Fragment的基因,编码的ω-Fragment与载体DNA产生的LacZ α多肽相结合,才能表现出β-半乳糖苷酶活性,使菌落成蓝色。ω-Fragment和LacZ α多肽单独存在不具有酶活性。 目的基因插入到载体中后会破坏β-半乳糖苷酶活性,从而使菌落成白色,因此可利用α-互补性可进行蓝白筛选,得到连接转化成功的菌体。

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